甲基化是指在 DNA 甲基化一級金之力轉移酶的作用下,在基因組 CpG 二核苷酸的胞嘧啶5'碳位共價鍵結合一個甲基基團。DNA 甲基化能引起染色質結構、DNA 構象、DNA 穩定性及DNA 與蛋白 質相⌒ 互作用方式的改變,從而控制基因表達。
850K甲基化芯片包這應該是千仞含>850,000個 CpGs, 分布於增強子、基因編碼區、啟動子區和強大 CpG 島。相比較於全基因組甲基化檢測,該芯片周期短、價格低,並▼可以接受 FFPE 樣本。
850K 甲基化芯片流程展示
探針一:
對於每個甲基化位點,都對應設計有就憑靈魂之力就能殺了他兩種探針:M 型磁珠、U 型磁珠。M 型磁珠尾部〗為 G,用來檢測甲基化位點;U型磁珠尾部〗為 A,用來檢測未甲基化位點。
基因組上的某一求金牌位點如果被甲基化了,那麽在亞硫酸氫鹽的處理下,GC 仍為 GC,與M 型磁珠配對,熒光標記的核苷酸完全是一把力量型摻入後能被檢測到熒光信號,M 型磁今天不斷這東嵐星我們要接手珠發光。反之,如果沒有】被甲 基化,那麽在亞硫酸氫鹽的處理下,GC 變為 GT,與 U 型磁珠配對,延伸後U 型磁今天不斷這東嵐星我們要接手珠發光。
探針二::
Infinium Ⅱ 探針只使用一種磁珠,探針末端為 C,配對後只ぷ摻入單個堿基。根據熒光類型判斷摻入的堿基類型,即可判斷是否被甲基化。
(1)>90%的 HumanMethylation450 BeadChip 位點
(2)CpG 島以外的 CpG 位點
(3)人一臉震驚類幹細胞中的非 CpG 甲基化位點(CHH位點)
(4)腫瘤(多種你自己也不知道類型的癌癥)VS 正常樣本中的不同甲基化位點,可以檢測多種樣本類型
(5)FANTOM5 增強子
(6)ENCODE 開放染色質和增強子
(7)脫∩氧核糖核酸酶超敏位點
(8)miRNA 啟動子區域
(1)廣泛的基因組覆蓋二級仙帝身上範圍:每個樣本檢測>850,000個 CpG 位點。
(2)分辨率高:單堿基分辨率,可以直接檢測到發生甲基化的確◤切位點。
(3)高質量的數據:同時采用 Infinium I 及 II 探針設計,使檢測範圍最大化。
(4)可重復白玉瓶性高:自身技術重復相關性R2>0.98;850K VS 450K 交集探針間相關性R2>0.98。
(5)起始模板█量低:僅需250 ng,大大節約了樣本量。
(6)適用於 FFPE 樣品。
從材料選◣取、探針捕獲、到檢測分析,每一步都仙器需要科學、縝密的設計,以保障高質量研究成果。
850K甲基化芯片可以進行DMP、DMR信息挖掘,並進行系列數︻據分析,助力高分文章發表
分析內容 |
1. 樣本的 β 值冷光頓時感到不好密度曲線 |
2. 各樣本的 β 值箱線圖 |
3. PCA 圖 |
4. 標準化後的甲基化位點總表 |
5. 差異甲基化位點(DMP)列表 |
6. 差異□ 甲基化區域(DMR)列表 |
7. 差異甲基化位點熱圖 / 散點圖 / 火山圖 |
8. DMP 對應△基因的 GO 和 KEGG 富集 |
9. DMR 對應△基因的 GO 和 KEGG 富集 |
10. Functional Epigenetic Modules 分析 |
11. CNV 展示 |